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          科研成果

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          大鯢糖肽潤膚霜的制備及性能評價

          通過添加大鯢糖肽制備了潤膚霜,探討了大鯢糖肽的吸濕性與抗氧化性,大鯢糖肽潤膚霜的抗紫外線性與豚鼠皮膚涂 抹的變態反應。結果表明: 在低濕度條件下,大鯢糖肽的吸濕率達 3.8% ,在高濕度條件下,大鯢糖肽的吸濕率達 15.6% ; 羥基自由基 清除率為 50.85% ; 添加了大鯢糖肽在 260~315 nm 下具有較強紫外線吸收能力; 涂抹大鯢糖肽潤膚霜和大鯢糖肽的豚鼠皮膚沒有出 現任何的紅斑和水腫,與對照組的豚鼠的皮膚一致。


          關鍵詞: 大鯢糖肽; 吸濕性; 抗紫外線; 抗氧化

           

          生物活性糖肽是指對生物機體的生命活動有益或具有生理 作用的肽類化合物,是蛋白質中 20 個天然氨基酸以不同組成和 排列方式構成的從二肽到復雜的線性、環形結構的不同肽類的 總稱,也是源于蛋白質的多功能化合物。
          糖肽的抗氧化活性與其氨基酸序列及糖鏈組成有著密切的 關系。有研究表明,含有組氨酸的肽可能具有螯合金屬。猝滅活性氧和清除羥自由基的能力。另有研究報道氨基酸殘基的氧 化是抗氧化肽能夠清除自由基的原因之一,但是游離氨基酸并 沒有表現出抗氧化活性,因為肽的一級結構是構成其具有抗氧 化作用的必要因素。
          以天然成分為化妝品功能性原料,大大提高了有效活性物的濃度。大多數的臨床數據表明,天然成分化妝品的療效明顯, 針對性強,絲毫不在合成藥物之下。長期使用無副作用或副作 用極小,特別適用于預防性的化妝品和美容品。大鯢糖肽具 有較好的抑菌活性、吸濕保濕性能、抗紫外和抗氧化等特性,它 可以防止皮質層水分損失,保持皮膚的滋潤和健康。肽類物質具有生理活性,營養價值高于游離氨基酸,易吸收、溶解度高、粘 性低、有很強的吸濕性,可用作保濕型添加劑生產各種化妝 品。大鯢糖肽能有效地清除活性氧自由基,保護細胞和線粒體的正常結構和功能,防止脂質過氧化的發生,因此,它具有保護皮膚的效果。據此,本文研究了大鯢糖肽的吸濕性與抗氧化性,大鯢糖肽潤膚霜的抗紫外線性與豚鼠皮膚涂抹的變態反應。

          1 材料與方法

          1.1 材料
          大鯢糖肽,2009年12 月由張家界(中國)金馳大鯢生物科技有限公司制備; 其他化學試劑均為國產分析純試劑。豚鼠,購買于大連醫科大學動物實驗中心。 

          1.2 方法

          1.2.1 大鯢糖肽吸濕性能的測試
          室溫下,在干燥器中放置硫酸鈉飽和溶液維持相對濕度 (RH)43% ,放置硫酸銨飽和溶液維持相對濕度(RH)為 81% 。 準確稱取 0.5 g 干燥后大鯢黏液試樣放入直徑為 3 cm 的稱量瓶 中,再把稱量瓶分別放入置有以硫酸鈉飽和溶液維持相對濕度 (RH)43% 和以硫酸銨飽和溶液維持相對濕度(RH)81% 的干燥 器中,放置時間 6、12、24、36、48 h,分別稱量樣品放置前的質量 (mo )和放置后的質量(mn ),根據下式計算吸濕率: 吸濕率(% )= (mn - mo)/ mo × 100% 式中: mo 為試樣吸濕前質量,mn 為吸濕 48 h 后質量。 
          1.2.2 大鯢糖肽抗氧化性能的測試
          大鯢糖肽羥基自由基清除活性的測定: H2O2 和鐵離子混合發生 Fenton 反應,生成具有很高反應活動的·OH,其可被 2 - 脫 氧核糖有效地捕捉,并生成有色物質; 但若加入具有清除作用的物質,便會于 2 - 脫氧核糖競爭,從而使有色產物生成量減少。 在 10 mL 的試管中依次加入 6 mmol /L 的 FeSO4 溶液 0.4 mL, 6 mmol /L的 2 - 脫氧核糖溶液 0.4 mL,搖勻,分別將試管置37.5 ℃水浴鍋中 1 h 后取出放入沸水浴中 10 min,后放入冰水 中冷卻10 min。取適量倒入離心管中3 000 r/min 離心10 min 后 在 532 nm 處測定吸光度,根據下式計算清除率: 清除率(% )= { [(C - CB )- (S - SB)]/(C - CB )} × 100 式中: C———空白液的吸光度 CB———空白本底液的吸光度 S———加入試樣液后的吸光度 SB———本底液吸光度 
          1.2.3 大鯢糖肽潤膚霜的制備
          潤膚霜配方如表 1 所示。

          表 1 潤膚霜配方

          將油相原料和油溶性乳化劑如表 1,在不斷攪拌下混合加熱 至 80 ℃,維持 20 min 滅菌,將水相原料和水溶性乳化劑加入至 蒸餾水中,攪拌下加熱至 80 ℃,維持 20 min 滅菌,然后冷卻,將大鯢糖肽緩慢加到水相中攪拌乳化,再將水相加入到油相中,當 溫度降至 45 ℃時加入香精,繼續攪拌冷卻成膏。 
          1.2.4 大鯢糖肽潤膚霜抗紫外線性能表征
          分別取大鯢糖肽 0.1 g、0.2 g,各加入 100 mL 蒸餾水,稀釋 至 0.1% 和 0.2% ,攪拌至均勻。然后分別各取 3 mL 樣液和 3 mL TCA 放置試管中。然后每個樣液取 1.5 mL 放置離心管中 在 - 4 ℃以轉速 10 000 r/min 離心 20 min。取上清液用紫外可 見分光光度計測抗紫外線能力。 
          1.2.5 大鯢糖肽潤膚霜穩定性測試 根據 QB/T1684 - 93 標準對試穩定性耐熱、耐寒、離心穩定 性實驗。 
          1.2.6 變豚鼠皮膚變態反應試驗 試驗前動物要在實驗動物房環境中至少適應 3 ~ 5 d。將動 物隨機分為受試物組和對照組,按所選用的試驗方法,選擇適當部位給動物備毛(去毛),避免損傷皮膚。動物數: 試驗組為 12 只,對照組為 2 只。試驗前約 24 h,將豚鼠背部左側去毛,去 毛范圍為 4 ~ 6 cm。誘導接觸: 將受試物約 0.2 mL(g)涂在實驗動物去毛區皮膚上,以二層紗布覆蓋,再以無刺激膠布封閉固定 6 h。第 7d 和第 14 d 以同樣方法重復一次。激發接觸: 末次誘 導后 14 ~ 28 d,將約 0.2 mL 的受試物涂于豚鼠背部右側 2 cm × 2 cm去毛區(接觸前24 h 脫毛),然后用二層紗布覆蓋,再以無刺 激膠布固定 6 h。激發接觸后 24 h 和 48 h 觀察皮膚反應。 
          1.2.7 大鯢糖肽潤膚霜中重金屬含量的測定 根據食品中重金屬含量的檢測依據,檢測大鯢糖肽中重金屬的含量。 
          1.2.8 人體試用安全性評價
          按受試者入選標準選擇正常男性受試者 15 例,正常女性受 試者 15 例,按照化妝品產品使用特點和方法讓受試者直接使用 受試產品。每周 1 次觀察或電話隨訪受試者有無全身性不良反 應如惡心、乏力、月經紊亂及其它不適等,觀察涂抹樣品部位皮 膚反應,按表 2 皮膚不良反應分級標準記錄結果。

          表 2 人體試用試驗

          2 結果與討論

          2.1 大鯢糖肽吸濕率 分別考察了大鯢糖肽樣品在兩種濕度下隨時間的變化而導 致的吸濕率的變化。在低濕度條件下,大鯢糖肽的吸濕率達 3.8% ,在高濕度條件下,大鯢糖肽的吸濕率達 15.6% (圖 1)。大鯢糖肽具有一定的吸濕特性。因此,在氣候干燥地區,大鯢糖肽潤膚霜可起到良好的保濕效果。 

          圖 1 在高、低濕度條件下大鯢糖肽的吸濕率

          2.2 大鯢糖肽抗氧化性能

          大鯢糖肽羥基自由基清除率為 50.85% 。自由基是具有高度化學活性的物質,人體內自由基過多或清除過慢,即會引發所 謂的自由基鏈式反應,導致細胞膜的過氧化,它是引起機體衰老的根本原因。研究所得大鯢糖肽羥基自由基清除率為 50.85% , 可作為抗衰老化妝品的重要功效成分。 

          2.3 大鯢糖肽抗紫外線的性能
          在紫外分光光度計上分別于 200 ~ 400 nm 之間測定大鯢糖肽的吸光度值。因為200 ~ 250 nm 屬于長波紫外線,對人體皮膚不會造成很大的傷害,315 nm 以上的波長不會穿透大氣層,對人 體皮膚也不會造成傷害,所以只有在260 ~ 315 nm 處會對人體皮 膚造成傷害,從上述表格數據和數據線中可以看出,在 260 ~ 315 nm 的高能區域內,吸收曲線出現低谷,說明此波長范圍的紫外吸收率較大,說明大鯢糖肽具有一定的抗紫外能力。同時也可 以看出,濃度為 0.1% 的大鯢糖肽水溶液抗紫外線能力最強(圖 2)。

          圖 2 抗紫外能力的檢測 1 號: 0.1% 的大鯢糖肽溶液; 2 號: 0.2% 的大鯢糖肽溶液

          2.4 大鯢糖肽潤膚霜產品穩定性能評價 依據中華人民共和國行業標準 QB/T1684 - 93,對樣品進行 耐熱、耐寒、離心穩定性測試,結果如表 3 所示。 表 3 結果表明大鯢糖肽潤膚霜具有良好的耐熱、耐寒性能, 離心測試未出現分層。此配方使用的多為熔點較低的油質原 料,因此膏體軟、流動性好,涂抹保濕霜受感覺膏體潤濕感好。 

          表 3 潤膚霜性能測試


          2.5 豚鼠皮膚變態試驗結果
          在涂抹化妝品的試驗組中,涂抹化妝品的背部皮膚沒有出 現任何的紅斑和水腫,在涂抹大鯢糖肽試驗組中,涂抹大鯢糖肽的背部皮膚同樣也沒有出現任何的紅斑和水腫,與對照組背部去毛區域基本一致。說明化妝品和大鯢糖肽對動物皮膚沒有發生皮膚變態反應,對動物皮膚是無毒的,可以放心使用。 

          2.6 結果安全性評價 在 15 例男性例受試者和 15 例女性受試者中沒有出現皮膚不良反應,判定受試物對人體沒有不良反應。

           3 結 論 
           (1)在低濕度條件(RH = 43% )下,大鯢糖肽的吸濕率達 3.8% ,在高濕度條件下(RH = 81% )大鯢糖肽吸濕率達 15.6% ; 
           (2)大鯢糖肽羥基自由基清除率為 50.85% ; 
           (3)在 260 ~ 315 nm 的高能區域內,吸收曲線出現低谷,說明此波長范圍的紫外吸收率較大,說明大鯢糖肽具有一定的抗紫外線吸收能力,但是作用不是很大; 
           (4)以大鯢糖肽制備的潤膚霜穩定性符合中華人民共和國行業標準QB/T1684-93 的要求; 
           (5)涂抹大鯢糖肽化妝品的豚鼠皮膚沒有發生任何的變態反應;
           (6)涂抹大鯢糖肽化妝品的人體受試者沒有發生任何不良反應。

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